結(jié)直腸癌（CRC）的發(fā)生發(fā)展以 mTORC2 信號(hào)通路的持續(xù)激活為核心驅(qū)動(dòng)，其介導(dǎo)的細(xì)胞增殖與遷移被視為惡性轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素，但目前針對(duì) mTOR 催化活性的抑制劑在臨床應(yīng)用中仍存在耐藥性或反應(yīng)不一，這提示復(fù)合物內(nèi)部結(jié)構(gòu)穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)存在尚未被發(fā)現(xiàn)的放大機(jī)制。SLAP 蛋白作為已知的抑癌因子在 CRC 中顯著下調(diào)，且具有抑制致癌信號(hào)的潛力，但其是否以及如何通過(guò)干預(yù) mTORC2 核心復(fù)合物的完整性來(lái)協(xié)同阻斷腫瘤進(jìn)展仍屬未知。本文即在這一空白背景下，系統(tǒng)探討 SLAP 在結(jié)直腸癌中的抑癌作用，并重點(diǎn)解析其通過(guò) UBE3C 介導(dǎo) mLST8 非降解性泛素化從而瓦解 mTORC2 復(fù)合物的全新分子機(jī)制。

SLAP 促進(jìn)了由 UBE3C 介導(dǎo)的 mLST8 賴(lài)氨酸位點(diǎn)（K86 和 K215）的非降解性泛素化，進(jìn)而破壞了 mTORC2 復(fù)合物的結(jié)構(gòu)完整性，從而抑制其促癌活性。SLAP 的差異化表達(dá)決定了結(jié)直腸癌（CRC）細(xì)胞對(duì) mTOR 催化抑制劑（mTORCi）的應(yīng)答敏感性：SLAP 低表達(dá)的腫瘤細(xì)胞對(duì) mTORCi 表現(xiàn)敏感，而 SLAP 高表達(dá)的細(xì)胞則可能出現(xiàn)悖論式激活。

結(jié)論 1：SLAP是mTORC2 的內(nèi)源性抑制蛋白并下調(diào)其信號(hào)活性

研究者首先通過(guò)質(zhì)譜篩選發(fā)現(xiàn) SLAP 與 mTORC2 的核心組分存在物理互作。內(nèi)源性免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí) SLAP 能與 RICTOR 和 mTOR 結(jié)合。隨后，在 CRC 細(xì)胞系中過(guò)表達(dá) SLAP顯著降低了 mTORC2 經(jīng)典下游底物 AKT（S473）和 NDRG1（T346）的磷酸化水平，而對(duì) mTORC1 底物影響較小。這初步證明了 SLAP 是 mTORC2 信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子。

Fig1. SLAP抑癌功能由mTORC2介導(dǎo)

結(jié)論 2：SLAP 抑制結(jié)直腸癌的惡性表型高度依賴(lài)于 mTORC2 的存在

為了確認(rèn) SLAP 的抑癌功能是否通過(guò) mTORC2 實(shí)現(xiàn)，研究者進(jìn)行了功能回復(fù)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，敲低 SLAP 會(huì)顯著增強(qiáng)細(xì)胞的侵襲力、遷移能力和克隆形成率；然而，當(dāng)同步敲低 mTORC2 的關(guān)鍵組分 RICTOR 時(shí)，由 SLAP 缺失導(dǎo)致的促癌效應(yīng)被完全逆轉(zhuǎn)。這在邏輯上建立了 SLAP 發(fā)揮抑癌作用的必要條件：必須通過(guò)抑制 mTORC2 軸來(lái)實(shí)現(xiàn)。

Fig2. SLAP與mLST8結(jié)合介導(dǎo)其抑癌功能

結(jié)論 3：SLAP 通過(guò)直接靶向 mLST8 來(lái)干擾 mTORC2 復(fù)合物的組裝

研究者進(jìn)一步探索 SLAP 如何干擾復(fù)合物的物理結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)域缺失實(shí)驗(yàn)表明，SLAP 與 RICTOR 的結(jié)合依賴(lài)于 mLST8 作為橋梁，SLAP 直接結(jié)合的是 mLST8。功能驗(yàn)證顯示，人為增加 mLST8 的表達(dá)水平可以拮抗 SLAP 的抑癌作用，并恢復(fù)被抑制的 mTORC2 信號(hào)。這鎖定并確認(rèn)了 mLST8 是 SLAP 調(diào)控整個(gè)復(fù)合物穩(wěn)定性的關(guān)鍵分子靶點(diǎn)。

Fig3. SLAP通過(guò)LST8泛素化調(diào)控mTORC2組裝

結(jié)論 4：SLAP 募集 UBE3C 介導(dǎo) mLST8 非降解性泛素化調(diào)控復(fù)合物解體

在分子機(jī)制層面，研究揭示了 SLAP 并非通過(guò)降解蛋白質(zhì)來(lái)起作用。實(shí)驗(yàn)證明SLAP 募集了 E3 泛素連接酶 UBE3C，進(jìn)而使得 mLST8 在 K86 和 K215 位點(diǎn)發(fā)生泛素化修飾。關(guān)鍵的生物物理分析顯示，這種泛素化修飾不會(huì)引起 mLST8 的蛋白酶體降解，而是通過(guò)空間位阻效應(yīng)直接導(dǎo)致 mLST8 從 RICTOR/mTOR 復(fù)合物中脫離。復(fù)合物的“解體”最終關(guān)閉了信號(hào)傳導(dǎo)。

Fig. SLAP與UBE3C相互作用促進(jìn)LST8泛素化和mTORC2抑制

研究邏輯總結(jié)：

研究首先通過(guò)Co-IP分析確立了 SLAP 與 mTORC2 復(fù)合物的特異性結(jié)合，并證明其抑癌活性高度依賴(lài)于對(duì)該信號(hào)軸的下調(diào)作用；隨后在分子水平鎖定 mLST8 為其核心調(diào)控靶點(diǎn)，揭示了 SLAP 通過(guò)募集 E3 泛素連接酶 UBE3C 介導(dǎo) mLST8 發(fā)生非降解性泛素化修飾（K86/K215位點(diǎn)）的獨(dú)特機(jī)制。這一修飾導(dǎo)致了 mTORC2 復(fù)合物的物理結(jié)構(gòu)解體而非蛋白降解，從而阻斷了促癌信號(hào)傳導(dǎo)。該研究不僅發(fā)現(xiàn)了 mTORC2 完整性的內(nèi)源性調(diào)控開(kāi)關(guān)，更為針對(duì)結(jié)直腸癌的精準(zhǔn)干預(yù)提供了“破壞復(fù)合物穩(wěn)定性”的全新治療策略。