15221734409
當(dāng)前位置：首頁 > 實(shí)驗(yàn)服務(wù) > 轉(zhuǎn)基因疾病模型 > ZFNs動物模型
簡要描述：ZFNs動物模型：鋅指核酸酶（ZFNs）動物模型是利用鋅指核酸酶基因編輯技術(shù)構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)動物模型。鋅指核酸酶由鋅指蛋白（ZFP）和核酸酶（FokI）融合而成，鋅指蛋白能夠特異性結(jié)合目標(biāo)DNA序列，而核酸酶則負(fù)責(zé)切割DNA，從而在特定基因位點(diǎn)上引入雙鏈斷裂，誘導(dǎo)細(xì)胞的修復(fù)機(jī)制，實(shí)現(xiàn)基因敲除、敲入或突變。
更新時間：2025-08-02 12:08:07
訪 問 量：92
服務(wù)分類
相關(guān)文章
Related Articles詳細(xì)介紹
ZFNs 是第一代可編程基因編輯工具，通過融合 DNA 結(jié)合域（鋅指蛋白）與 DNA 切割域（FokI 核酸酶）實(shí)現(xiàn)靶向編輯：
鋅指蛋白結(jié)構(gòu)域：
由 30-34 個氨基酸重復(fù)單元構(gòu)成，每個單元通過 第 12、13 位可變殘基（RVDs） 識別特定堿基：
| RVD 類型 | 識別堿基 | 特異性 |
|---|---|---|
| NI | A | 高 |
| NG | T | 高 |
| HD | C | 高 |
| NN | G/A | 中等 |
單個鋅指識別 3 bp，串聯(lián) 3-6 個可靶向 9-18 bp 序列。
FokI 切割域：
需 二聚化 才能激活切割功能 → ZFNs 需成對設(shè)計(jì)（左臂/右臂），切割位點(diǎn)位于兩臂結(jié)合位點(diǎn)之間（間隔區(qū) 5-7 bp）。
編輯機(jī)制：
雙鏈斷裂（DSB）→ 細(xì)胞啟動修復(fù)路徑：
非同源末端連接（NHEJ） ：隨機(jī)插入/缺失（Indels），導(dǎo)致基因敲除。
同源定向修復(fù)（HDR） ：需外源修復(fù)模板（如 ssODN），實(shí)現(xiàn)點(diǎn)突變或基因插入。
技術(shù)突破：shou次實(shí)現(xiàn)哺乳動物基因組靶向編輯（2005 年），開啟精準(zhǔn)基因編輯時代 。
| 步驟 | 核心操作 | 創(chuàng)新優(yōu)化 |
|---|---|---|
| 靶點(diǎn)設(shè)計(jì) | 避開高重復(fù)/甲基化區(qū)域，間隔區(qū) 5-7 bp | 軟件預(yù)測（ZiFiT）提升結(jié)合效率 |
| 鋅指組裝 | 模塊化串聯(lián)法： |
3-6 個鋅指單元串聯(lián)
Golden Gate 克隆（BsaI/BsmBI） | 6 天完成構(gòu)建，成功率 >80% |
| 表達(dá)載體 | 雙啟動子載體（CMV/T7），支持 mRNA 合成與蛋白表達(dá) | 適配多物種（斑馬魚、小鼠、豬） |
| 遞送方式 | - 受精卵顯微注射 ZFNs mRNA
體細(xì)胞轉(zhuǎn)染 + 核移植（大型動物） | mRNA 遞送減少脫靶 |
| 修復(fù)增強(qiáng) | 聯(lián)合 ssODN 模板 + NHEJ 抑制劑（SCR7） | HDR 效率提升 3 倍 |
| 物種 | 靶基因 | 疾病模型 | 效率/表型 | 研究價值 |
|---|---|---|---|---|
| 斑馬魚 | golden | 白化病 | 95% F0 代色素缺失 | 發(fā)育基因功能篩選 |
| 小鼠 | Rag2/IL2rg | 免疫缺陷模型 | 雙基因敲除，人源化移植平臺 | 腫瘤免yi治療研究 |
| 豬 | GGTA1 | 異種器guan移植模型 | 敲除 α-Gal 抗原，降低超急性排斥 | 人源化器官開發(fā) |
| 果蠅 | yellow | 體色突變 | 生殖系突變率 5.7%（動物模型） | 基因功能保守性驗(yàn)證 |
高 GC 區(qū)域編輯：
無 PAM 序列限制，可靶向 CRISPR/Cas9 無法編輯的區(qū)域 。
低脫靶率需求：
治療性編輯中脫靶率 <0.1%（CRISPR 為 1-10%）。
大型動物模型：
豬、牛等物種中免疫原性低于 CRISPR 。
產(chǎn)品咨詢
掃碼關(guān)注
地址：上海市寶山區(qū)長江南路180號長江軟件園B650
歡迎來到